ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

УДК 577.15:576.367

Акадезин вызывает неапоптотическую гибель опухолевых клеток

В. А. Глазунова1*, К. В. Лобанов2, Р. С. Шакулов2, А. С. Миронов2, А. А. Штиль1 "Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН, 115478, Москва, Каширское ш., 24

■Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов, 117545, Москва, Дорожный пр-д, 1 *E-mail: [email protected] Поступила в редакцию 27.12.2012

РЕФЕРАТ Изучено действие акадезина (5-аминоимидазол-4-карбоксамид-1-0-О-рибофуранозид) на опухолевые и неопухолевые клетки различного видового и тканевого происхождения. Установлено, что акадезин вызывает неапоптотическую гибель опухолевых клеток; чувствительность неопухолевых клеток к действию этого соединения существенно ниже. Акадезин вызывает гибель опухолевых клеток с фенотипом лекарственной устойчивости, обусловленной экспрессией транспортера Р-гликопротеина и инактивацией проапоптотического белка р53. Необходимым условием гибели клеток является активность транспортеров аденозина, тогда как функция АМР-активируемой протеинкиназы не требуется. Преимущественная гибель опухолевых клеток под действием акадезина и особенности механизма его цитотоксичности обусловливают перспективность этого соединения в качестве противоопухолевого средства. ключевые слова акадезин, гибель клеток, опухолевые клетки.

введение

Акадезин (5-аминоимидазол-4-карбоксамид-1-Р-О-рибофуранозид, АИКАР) проходит клинические испытания в качестве препарата для лечения хронического лимфоцитарного лейкоза . Важное свойство акадезина - его преимущественная токсичность для опухолевых клеток при менее выраженном повреждении неопухолевых . Ранее показали, что акадезин способен стимулировать АМР-активируемую протеинкиназу (АМРК) -важный регулятор энергетического баланса клетки, контролирующий окисление жирных кислот, метаболизм глюкозы, синтез белков, жирных кислот и холестерина . Механизм действия акадезина обусловлен его фосфорилированием аденозинкиназой с образованием ZMP (5-амино-4-имидазолкарбоксамидриботида) - промежуточного продукта de novo-синтеза пуриновых оснований . ZMP, имитируя метаболические эффекты АМР, способен активировать АМРК. Противоопухолевое действие акадезина связывают с индукцией апоптоза . Вместе с тем имеются данные о неапоп-тотической гибели клеток и АМРК-независимом механизме действия акадезина на опухолевые клетки .

В настоящей работе изучено действие акадезина на клетки млекопитающих. Показано, что акадезин вызывает гибель опухолевых клеток различного тка-

невого происхождения, в том числе клеток, устойчивых к ряду противоопухолевых средств. Механизмы гибели клеток отличаются от апоптоза; их важной особенностью оказывается необходимость транспорта аденозина. Неопухолевые клетки менее чувствительны к действию акадезина. Избирательность ци-тотоксического действия и особенности механизмов гибели опухолевых клеток могут быть важными факторами, определяющими перспективность использования акадезина в терапии опухолей.

экспериментальная ЧАСТЬ

В экспериментах использовали следующие линии клеток человека: НСТ116 (аденокарцинома толстой кишки), НСТ116р53КО (изогенная сублиния, в которой не функционирует р53), К562 (промиелоцитар-ный лейкоз), К562/4 (сублиния, полученная после селекции на выживание в присутствии доксорубицина; экспрессирован белок множественной лекарственной устойчивости (МЛУ) P-гликопротеин; Pgp), MCF-7 (аденокарцинома молочной железы), MCF-7Dox (сублиния после селекции на выживание в присутствии доксорубицина; фенотип Pgp-опосредованной МЛУ), культуру фибробластов ПФЧ-2, лимфоциты крови здоровых доноров, а также клетки мыши: Р388 (лимфоцитарный лейкоз) и Sp2/0 (миелома). Реактивы приобретены в фирме «ПанЭко», Россия (кроме особо оговоренных случаев). Клетки культивировали в мо-

дифицированной Дульбекко среде Игла с добавлением 5% эмбриональной телячьей сыворотки (Bio-Whittaker, Австрия), 2 мМ L-глутамина, 100 ЕД/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина при 37°С, 5% СО2 в увлажненной атмосфере. В экспериментах использовали культуры в логарифмической фазе роста. Лимфоциты выделяли из периферической крови доноров центрифугированием в градиенте плотности фиколла-урографина (d = 1.077 г/см3).

Акадезин получали в ГосНИИГенетика микробиологическим способом с использованием оригинального рекомбинантного штамма . Кроме того, оценивали цитотоксичность акадезина фирмы Sigma. В этой же фирме приобретены дипиридамол - ингибитор рецепторов аденозина , 5-йодтубер-цидин - ингибитор аденозинкиназы, препятствующий превращению акадезина в ZMP, и zVAD-fmk (карбобензоксивалилаланил-аспартил--фторметилкетон) - пан-каспазный ингибитор. Все соединения растворяли в диметилсульфоксиде или воде (10-20 мМ) и хранили при -20°С. В день опыта готовили разведения препарата в культуральной среде. Для оценки цитотоксичности акаде-зина использовали МТТ-тест, окраску клеток йодидом пропидия и аннексином V, конъюгированным с флуоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ), определение

клеточного цикла в проточной цитофлуориметрии и электрофоретический анализ целостности геномной ДHK . В отдельных опытах препаратом сравнения служил алкильный катионный глицеро-липид гас-П-{4-[(2-этокси-3-октадецилокси)проп-1-илоксикарбонил]бутил}-№-метилимидазолийиодид, индуктор апоптоза .

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Преимущественная чувствительность опухолевых клеток к акадезину

В предварительных экспериментах мы установили, что препарат акадезина, полученный микробиологическим способом, и коммерческий акадезин идентичны по физико-химическим свойствам, чистоте, стабильности при хранении и цитотоксичности (данные не приведены). Для дальнейших исследований использовали акадезин, полученный авторским способом. В табл. 1 представлена цитотоксичность акадезина для трансформированных и нетрансфор-мированных клеток (культивируемых или свежевыделенных) различного видового и тканевого происхождения.

Из данных, представленных в табл. 1, следует, что к действию акадезина наиболее чувствительны

Таблица 1. Цитотоксичность акадезина для клеток млекопитающих

^етки Акадезин, мМ

G G.125 G.25 G.5 1.G 2.G

K562 1GG* 1GG 70 46 9 G

P388 1GG 36 30 20 9 G

Sp2/0 1GG 34 29 14 G G

K562/4 1GG 1GG 72 42 8 G

MCF-7 1GG 1GG 82 50 15 2

MCF-7Dox 1GG 1GG 86 48 17 1

HCT116 1GG 1GG 50 36 23 G

HCT116p53KO 1GG 1GG 54 34 25 G

ПФЧ-2, пролиферирующие 1GG 1GG 1GG 96 96 86

ПФЧ-2, непролиферирующие** 1GG 1GG 1GG 1GG 95 92

Донорские лимфоциты 1GG 1GG 1GG 98 94 90

Примечание. Представлены результаты MTT-теста после 72-часовой инкубации клеток. "Выживаемость клеток, инкубированных без акадезина, принимали за 100%. Каждое значение - среднее пяти независимых опытов, стандартное отклонение < 0%. ""Пролиферацию фибробластов останавливали культивированием клеток до монослоя (контактное торможение деления клеток).

клетки Р388 (лейкоз мыши) и Sp2/0 (миелома мыши): при концентрации акадезина, равной 0.125 мМ, выживает ~1/3 клеточной популяции. Другие исследованные линии трансформированных клеток также гибнут под действием субмиллимолярных концентраций акадезина. Важно, что цитотоксичность акадези-на практически одинакова в случае лейкозной линии К562 и ее сублинии с Pgp-опосредованной МЛУ (К562/4). То же верно для линии аденокарциномы молочной железы MCF-7 и сублинии с МЛУ (табл. 1). Сравнение цитотоксичности акадезина в отношении линии НСТ116 и сублинии НСТ116р53КО (устойчивой к ряду ДНК-повреждающих противоопухолевых соединений) показало, что инактивация проапоп-тотического белка р53 не приводит к увеличению выживания клеток в присутствии акадезина.

Столь же важна существенно более высокая выживаемость неопухолевых клеток в присутствии акадезина: гибель донорских лимфоцитов и нетранс-формированных фибробластов практически отсутствовала даже при действии акадезина в миллимо-лярных концентрациях в течение 72 ч непрерывного воздействия (табл. 1). Таким образом, акадезин вызывает преимущественную гибель трансформированных клеток (суспензионных и эпителиальных), в том числе сублиний, устойчивых к другим противоопухолевым соединениям. Неопухолевые клетки повреждаются акадезином в значительно меньшей степени. Эти особенности обусловливают перспективность использования акадезина в качестве противоопухолевого средства. Однако для этого важно установление механизмов токсичности акадезина для опухолевых клеток.

Акадезин вызывает неапоптотическую гибель клеток

Влияние акадезина на распределение плоидно-сти клеток линии аденокарциномы толстой кишки НСТ116 изучено методом проточной цитофлуориме-трии. Через 24 ч после внесения акадезина (0.25 мМ) определяли накопление клеток в фазе S, а через 48 ч (рис. 1) - массовую гибель клеток (область слева от пика G1; гиподиплоидные ядра).

Накопление фрагментированной ДНК может быть признаком апоптотической гибели клеток, если расщепление ДНК происходит в межнуклеосомных промежутках, что видно по образованию набора фрагментов длиной 140-170 п.н. при электрофорезе. Для проверки этой возможности определяли целостность ДНК в клетках НСТ116, обработанных акадези-ном. Оказалось, что акадезин, в отличие от препарата сравнения - алкильного катионного глицеролипида , не приводит к появлению характерной для апоп-тоза «лестницы» фрагментов ДНК (рис. 2).

Флуоресценция

Рис. 1. Распределение клеток линии НСТ116 по фазам цикла при действии 0.4 мМ акадезина. А - интактные клетки; В - накопление в фазе S через 24 ч; В - накопление в области суб^1 через 48 ч

Аргументом в пользу неапоптотического механизма гибели клеток НСТ116 при действии акаде-зина служат результаты окрашивания клеток ан-нексином У-ФИТЦ и йодидом пропидия (рис. 3). Аннексин У связывает фосфатидилсерин на плазматической мембране (транслокация фосфатидил-серина из внутреннего липидного слоя мембраны

Рис. 2. Целостность ДНК в клетках линии НСТ116.

1 - Интактные клетки;

2 - акадезин, 0.4 мМ, 24 ч;

3 - алкильный катионный глицеролипид, 6 мкМ, 24 ч (контроль метода)

Рис. 3. Окраска клеток линии НСТ116 аннексином V-ФИТЦ и йодидом пропидия. Псевдоцвета: красный -интактные клетки; фиолетовый - акадезин (0.4 мМ, 24 ч); синий - алкильный катионный глицеролипид (контроль метода; см. подпись к рис. 2)

в наружный считается признаком апоптоза). Йодид пропидия способен проникать в клетки, подвергающиеся некрозу (нарушение целостности плазматической мембраны). Клетки линии НСТ116, обработанные акадезином (0.4 мМ, 24 ч), не окрашивались аннексином V-ФИТЦ; напротив, клетки накапливали йодид пропидия (рис. 3), что позволяет предположить некротический компонент механизма гибели. Сходные результаты получены при регистрации некротических клеток с помощью трипанового синего (данные не представлены). Вероятно, нарушение целостности плазматической мембраны - позднее событие при индуцированной акадезином гибели клеток. Препарат сравнения - алкильный катионный глицеролипид - вызывал характерное для апопто-за увеличение аннексин V-положительных клеток (рис. 3).

Поскольку апоптотическая гибель клеток предполагает активную роль каспаз, изучено действие пан-каспазного ингибитора zVAD-fmk на цитотоксичность акадезина. Клетки линии НСТ116 инкубировали с 200 мкМ zVAD-fmk в течение 30 мин, после чего в культуры вносили акадезин и продолжали инкубацию в течение 24 ч. Присутствие zVAD-fmk не снизило гибель клеток, что подтверждает заключение о неапоптоти-ческом механизме цитотоксичности акадезина.

Взаимодействие с рецепторами аденозина необходимо для гибели опухолевых клеток под действием акадезина

Перенос акадезина из внеклеточной среды в клетки может осуществляться транспортерами аденозина . Мы изучили эффект дипиридамола - ингибитора этих транспортеров, на цитотоксичность акаде-зина в линии клеток Р388. Оказалось, что в присутствии дипиридамола клетки нечувствительны даже к относительно высоким (до 0.8 мМ) концентрациям акадезина (табл. 2).

Для выяснения роли метаболического пути акадезин^МР-АМРК в цитотоксичности акадезина

Таблица 2. Цитотоксичность акадезина в комбинациях с дипиридамолом или 5-йодтуберцидином

Воздействие Акадезин, мМ

0 0.08 0.1 0.2 0.4 0.8

Акадезин 100* 79 З8 ЗЗ 20 18

Акадезин + дипиридамол, 5 мкМ 100 100 99 99 100 101

Акадезин + 5-йодтуберцидин, 0.05 мкМ 100 76 З9 З1 22 16

*Выживаемость (%) клеток лейкоза Р388 по данным МТТ-теста после инкубации в течение 72 ч.

(его фосфорилирование аденозинкиназой с образованием ZMP и активации AMPK) клетки инкубировали с акадезином и ингибитором аденозинкиназы 5-йодтуберцидином. Ингибитор не влиял на цитотоксичность акадезина (табл. 2). Из этого следует, что гибель клеток в ответ на акадезин не обусловлена образованием ZMP и активацией AMPK.

Таким образом, изучение механизмов цитотоксичности акадезина выявило ряд особенностей, указывающих на нетривиальный характер фармакологических эффектов этого соединения. Акадезин вызывает гибель культивируемых опухолевых клеток при существенно менее выраженном действии на неопухолевые. Акадезин токсичен для клеток с молекулярными детерминантами лекарственной устойчивости - экспрессией Pgp и нефункционирующим р53. Важно подчеркнуть неапоптотический характер гибели опухолевых клеток под действием акадезина. Эти результаты позволяют расценивать акадезин как своеобразный реагент для изучения механизмов гибели опухолевых клеток и перспективный кандидат в лекарственные средства.

Открытым остается вопрос о внутриклеточной мишени акадезина, взаимодействие с которой обусловливает гибель опухолевых клеток. Мы показали, что условием гибели клеток является функционирование транспортеров аденозина, тогда как активация АМРК не требуется. Правомерно предположить, что опухоли, экспрессирующие указанные транспортеры и рецепторы аденозина, будут наиболее чувствительны к акадезину. Роль транспорта пуриновых оснований в гибели клеток изучена недостаточно; требуется анализ дифференциальной экспрессии переносчиков и рецепторов аденозина в опухолях разного типа. Вероятно, повышенная экспрессия этих молекул окажется новым молекулярным маркером чувствительности опухолей к акадезину и критерием отбора больных для соответствующей терапии.

Работа поддержана Министерством образования и науки Российской Федерации (Государственный контракт № 16.N08.12.1010), а также частично поддержана Фондом некоммерческих программ «Династия».

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Acadesine. AICA Riboside, ARA 100, Arasine, GP 1 110.

Drugs R D. 2008. V. 9. № 3. P. 169-175.

2. Jose C., Bellance N., Chatelain E.H., Benard G., Nouette-Gau-lain K., Rossignol R. // Mitochondrion. 2012. V. 12. P. 100-109.

3. Jose C., Hebert-Chatelain E., Bellance N., Larendra A., Su M., Nouette-Gaulain K., Rossignol R. // Biochim. Biophys. Acta. 2011. V. 1807. P. 707-718.

4. van den Neste E., van den Berghe G., Bontemps F. // Expert Opin. Invest. Drugs. 2010. V. 19. № 4. P. 571-578.

5. Javaux F., Vincent M.F., Wagner D.R., van den Berghe G. // Biochem. J. 1995. V. 305. P. 913-919.

6. Merrill G.F., Kurth E.J., Hardie D.G., Winder W.W. // Endocrinol. Metab. 1997. V. 273. № 6. P. 1107-1112.

7. Su R.Y., Chao Y., Chen T.Y., Huang D.Y., Lin W.W. // Mol. Cancer Therapy. 2007. V. 6. № 5. P. 1562-1571.

8. Theodoropoulou S., Kolovou P.E., Morizane Y., Kayama M., Nicolaou F., Miller J.W., Gragoudas E., Ksander B.R., Vavvas D.G. // FASEB. 2010. V. 24. P. 2620-2630.

9. The Handbook of Metabolomics. Methods in Pharmacology and Toxicology / Eds Whei-Mei Fan T. et al. 2012. V. 17. P. 439-480.

10. Walker J., Jijon H.B., Diaz H., Salehi P., Churchill T., Madsen K.L. // Biochem. J. 2005. V. 385. P. 485-491.

11. Campas C., Santidrian A.F., Domingo A., Gil J. // Leukemia. 2005. V. 19. P. 292-294.

12. Lopez J.M., Santidrian A.F., Campas C., Gil J. // Biochem. J. 2003. V. 70. P. 1027-1032.

13. Guigas B., Sakamoto K., Taleux N., Reyna S.M., Musi N., Viollet B., Hue L. // IUBMB Life. 2009. V. 61. № 1. P. 18-26.

14. Лобанов К.В., Эрраис Лопес Л., Королькова Н.В., Тяглов Б.В., Глазунов А.В., Шакулов Р.С., Миронов А.С. // Acta Naturae. 2011. T. 3. № 2 (9). С. 83-93.

15. Lysenkova L.N., Turchin K.F., Korolev A.M., Bykov E.E., Da-nilenko V.N., Bekker O.B., Trenin A.S., Elizarov S.M., Dezhen-kova L.G., Shtil A.A., Preobrazhenskaya M.N. // J. Antibiotics. (Tokyo). 2012. V. 65. № 8. P. 405-411.

16. Симонова В.С., Самусенко А.В., Филиппова Н.А., Тевяшо-ва А.Н., Лынив Л.С., Кулик Г.И., Чехун В.Ф., Штиль А.А. // Бюлл. эксп. биол. мед. 2005. Т. 4. С. 451-455.

17. Маркова А.А., Плявник Н.В., Плетнева М.В., Серебренникова Г.А., Штиль А.А. // Клин. онкогематол. 2012. Т. 5. № 2.

18. Shchekotikhin A.E., Glazunova V.A., Dezhenkova L.G., Shevtsova E.K., Traven’ V.F., Balzarini J., Huang H.-S., Shtil A.A., Preobrazhenskaya M.N. // Eur. J. Med. Chem. 2011. V. 46. P. 213-218.

19. Gadalla A.E., Pearson T., Currie A.J., Dale N., Hawley S.A., Sheehan M., Hirst W., Michel A.D., Randall A., Hardie D.G., Frenguelli B.G. // J. Neurochem. 2004. V. 88. P. 1272-1282.

Атмосфера на нашей планете, расстояние до солнца и множество других невероятных совпадений привели к тому, что на Земле может существовать жизнь в том виде, как мы её знаем. Всё это воспринимается нами как данность, и мы, спеша на работу или отдыхая за столиком в кафе, не находим ничего удивительного в нашем существовании. Но всё хорошее когда-нибудь кончается. Однажды Земля станет непригодной для поддержания той жизни, которую мы знаем. Может быть, этого не случится еще миллионы лет. Но астрофизика нам подсказывает, что катастрофа может произойти в любой момент. И учёные нашли немало причин, по которым Земля может стать безжизненной.

1) Ядро планеты остынет


Земля окружена магнитным полем, называемым магнитосферой, которая защищает нас от солнечного ветра.
Это поле создаётся благодаря вращению планеты, из-за которого жидкая железоникелевая оболочка (внешнее ядро) движется вокруг твердой металлической сердцевины (внутреннего ядра), образуя гигантский магнитный генератор.
Магнитосфера отклоняет энергетические частицы, испускаемые солнцем, изменяет их размер и форму.
Если ядро планеты остынет, то мы потеряем нашу магнитосферу – а также защиту от солнечного ветра, из-за чего он постепенно разнесёт атмосферу Земли по всему космосу.
Марс, у которого когда-то была вода и атмосфера, несколько миллионов лет назад постигла именно такая участь, и он превратился в сухой и безжизненный мир, каким мы его знаем теперь.

2) Произойдёт расширение Солнца


Солнце, а особенно наше расстояние до него – это, пожалуй, самый важный фактор, благодаря которому стало возможно существование жизни.
Однако Солнце – звезда. А звёзды умирают.
Прямо сейчас Солнце находится в середине своего жизненного пути, постоянно превращая водород в гелий при помощи термоядерных реакций.
Но это не может длиться вечно. Через несколько миллиардов лет водород в ядре Солнца закончится, и оно начнёт перерабатывать гелий.
Из-за того, что переработка гелия даёт гораздо больше энергии, Солнце начнёт расширяться, и, возможно – притягивать Землю к себе.
Мы сгорим и испаримся.
Либо так, либо расширение солнца напротив, оттолкнёт Землю, она сойдет со своей орбиты и будет обречена скитаться по космосу как планета-странник – мёртвым куском холодного камня.

3) Земля столкнётся с планетой-странником

В космосе немало планет, которые перемещаются по нему свободно, а не вращаются вокруг звезды. Планеты достаточно часто оказываются выкинуты из своих звёздных систем во время их формирования.
Недавние расчёты показывают, что количество планет-странников в Млечном Пути превосходит количество звёзд в 100 000 раз.
Одна из таких планет может приблизиться к Земле и опасно дестабилизировать её орбиту.
Или бродячая планета может столкнуться с Землёй. Причём такое уже случалось – около 4,5 млн. лет назад маленькая планета столкнулась с более крупной, что сформировало Землю и Луну такими, как мы их знаем.

4) Земля столкнётся с астероидом

В Голливуде очень любят такие сценарии.
Камни из космоса могут быть очень разрушительными – уничтожил же один из них динозавров. Хотя, конечно, для того, чтобы уничтожить планету полностью нужно гораздо больше астероидов.
Но это всё равно может произойти. Например, в течение сотен миллионов лет с момента формирования Земли астероиды сталкивались с ней очень часто. Удары были так сильны, что океаны кипели годами, а температура воздуха была выше 500 градусов по Цельсию. Жизнь на Земле тогда была одноклеточной, и была представлена в виде особо жаростойких микробов. Большая часть современных форм жизни такого бы не перенесла.

5) Земля может сблизиться с блуждающей чёрной дырой


Чёрные дыры, пожалуй, вторая по популярности в Голливуде причина смерти планеты. Легко понять почему.
Они загадочные и пугающие. Даже само их название звучит жутковато.
Мы немногое знаем о чёрных дырах, зато знаем, что они настолько массивны, что даже свет не может вырваться за пределы их горизонта событий.
Также учёные знают, что существуют чёрные дыры, свободно путешествующие по космосу. Так что не исключено, что одна из них может навестить и Солнечную систему.
Если уж свет не может вырваться из чёрной дыры, то Земля уж точно не сможет. Есть две теории того, что произойдёт с планетой после того, как она пересечёт точку невозврата достаточно большой чёрной дыры. Менее крупная просто растянет (как говорят астрофизики, «спагеттифицирует») планету.
Некоторые физики говорят, что за горизонтом событий атомы будут растягиваться до тех пор, пока не уничтожаться полностью.
Иные – что мы попадём в другую часть вселенной, а то и в другое измерение.
Но, даже если чёрная дыра не затянет в себя Землю, то пройдя достаточно близко, она может вызвать землетрясения и другие стихийные бедствия или нарушить орбиту планеты, так что мы либо покинем солнечную систему, либо упадём на Солнце.

6) Земля будет уничтожена всплеском гамма-излучения


Всплески гамма-излучения (или просто гамма-всплески) – одни из самых мощных явлений во вселенной.
Многие из них – результат коллапса звезды во время её смерти. Один короткий всплеск может содержать больше энергии, чем Солнце может выработать за всю свою жизнь.
Такой мощный поток энергии может лишить Землю озонового слоя, сделав нас беззащитными перед опасным ультрафиолетовым излучением, и запустить механизм быстрого глобального похолодания.
Гамма-всплеск, попавший в Землю 440 млн. лет назад, мог быть причиной первого массового вымирания.
Но, к счастью, Дэвид Томпсон, заместитель руководитель проекта по наблюдению за гамма-излучением, сказал, что гамма-всплески на самом деле не очень опасны.
Он сказал, что шанс того, что Земля попадёт в поток гамма-всплеска, примерно равен «шансу того, что я встречу полярного медведя у себя в туалете».

7) Вселенная распадётся на части в своём последнем «Большом Разрыве»


Это то, что может уничтожить всю вселенную, не только Землю.
Суть вот в чём: неизвестная сила, называемая тёмной энергией, заставляет вселенную расширяться всё быстрее и быстрее.
Если расширение продолжится (что очень возможно), через 22 миллиарда лет межатомные связи ослабнут, и вся материя во вселенной постепенно рассеется в виде энергии.
Но если предположить, что Большого разрыва всё же не случится, то что может произойти после глобальной катастрофы, которую не переживёт человечество?
Вполне возможно, что выживут некоторые микробы, из которых потом вновь разовьётся жизнь.
Но если уничтожение будет абсолютным, то, на крайний случай, мы можем надеяться, что где-то во вселенной есть другая разумная жизнь, которая сможет отдать нам последние почести.

Пожары - как и любое проявление необузданной стихии – всегда несут с собой разрушения и смерть. Но особенно тяжелыми последствиями отличаются те из них, которые вспыхивают в общественных, жилых зданиях с массовым пребыванием людей.

Гибель людей на пожарах во многом обусловлена отсутствием противопожарных знаний и навыков у российских граждан. Люди зачастую не знают не только элементарных правил пожарной безопасности, но даже номера телефона ближайшей пожарной части. Не говоря уже о действиях в начальный момент развития пожара до прибытия подразделений пожарной охраны, о способах самоспасения в экстремальной ситуации. Особенно это характерно для жилых домов, где происходит наибольшее количество пожаров с гибелью людей.
Что же является причиной гибели людей на пожаре? Что нужно знать о пожаре, чтобы остаться в живых?

1. Пожар ослепляет, Вы не можете видеть в огне.
Если Вы никогда не испытывали реальных факторов пожара, Вы будете в состоянии полного шока.
К своему ужасу Вы узнаете, что при настоящем пожаре Вы не можете ничего видеть. Пламя делает все черным. Оно не несет света. Ничего не видно, только жар и пепел, страшная темнота. Вы совершенно не можете ориентироваться, не можете найти знакомую Вам дверь выхода. Полная потеря ориентации вследствие паники. Пожар черный как ночь, что и приведет к неминуемой гибели.

Для того чтобы избежать этого, используют в зданиях:
- аварийное освещение;
- светоуказатели «эвакуационный (запасной) выход»;
- знаки пожарной безопасности, используемые на путях эвакуации,
в том числе светящиеся в темноте;
- электрические фонари.

2. Убивает дым и газ, а не пламя.
Современная квартира буквально начинена предметами: и материалами, которые при горении в огромных количествах выделяют более 70 видов токсичных веществ (окись углерода, углекислый таз, дифосген, фосген, цианистый водород и др.). Несколько вдохов в такой атмосфере - и человека уже не спасти.

В основном люди гибнут не от огня или обрушившихся конструкций, а от дыма и недостатка кислорода. Причем более половины пострадавших от дыма гибнет на месте пожара. 42% пострадавших от оставшихся в живых, получают тяжелые отравления, каждый третий из них умирает в больнице не приходя в сознание. Около 70% от всех погибших на пожаре умирают от воздействия дыма, причем скорость его распространения велика: 2-3 минуты коридор, 1-1,5 минуты лестничная клетка десятиэтажного здания.

Самое опасное, если пожар возникает в жилом доме среди ночи. Вы думаете, что проснетесь и начнете действовать? Однако страшный факт состоит в том, что Вы не проснетесь от запаха дыма. От него Вы только еще крепче заснете. Вы впадаете в глубокий сон, как если бы находились под наркозом. Вы не можете двигаться. Дым омертвляет Ваш мозг.

Девяносто процентов людей, которых находят пожарные в дыму, выглядят так, как будто они спали.

Если Вы находитесь в помещении, наполненном дымом, Вы не только ничего не можете видеть, но и не можете дышать. Это подобно тому, если Вы тонете и голова под водой. Вам страшно. Вы забываете все, что как Вам казалось, знаете о пожаре. Вы теряетесь, впадаете в панику, ведете себя непредсказуемо, т.к. не готовы психологически к подобной экстремальной ситуации.

Для борьбы с дымом используются:
- незадымляемые лестничные клетки (за счет подпора воздуха или поэтажных входов через воздушную наружную зону по балконам или лоджиям);
- удаление дыма из помещений, коридоров через автоматически открывающиеся клапаны дымоудаления за счет включения мощных вытяжных вентиляторов;
- установка в коридорах на лестничных клетках дверей самозакрывающихся с уплотненными притворами, препятствующими распространению дыма;
- устройство системы автоматической пожарной сигнализации (дымовые и тепловые датчики, кнопки ручной пожарной сигнализации, звонки пожарной тревоги, станции пожарной сигнализации);
- системы оповещения людей о пожаре и управления эвакуацией;
- средства индивидуальной защиты органов дыхания при пожаре;
- автономные пожарные извещатели, работающие от батарейки для квартир жилых домов;
- групповые и индивидуальные спасательные комплекты, веревочные лестницы.

3. Жар от огня способен вызвать мгновенную гибель.Жар страшен. Он убивает. Один только жар вызывает смертельный исход в течение считанных секунд. Это очень трудно описать словами. При 65°С Ваше тело перестает функционировать, легкие буквально испаряются, человек теряет сознание.

В комнате пожар продолжительностью чуть больше одной минуты создает температуру в слое дыма 370°С. Если незащищена голова, то наступает мгновенная смерть. Вверху температура и концентрация дыма еще выше. Когда в комнате будет гореть все, что может гореть - жар достигнет своего апогея. Сам дым готов к взрыву, кажется, все строение взлетит на воздух. В таком жаре нет шансов остаться в живых.

4. Пожар не оставляет на раздумье времени. Нужно успеть вырваться из огня.
Большинство людей думают, что у них остается время при пожаре. Но это не так, при пожаре нет времени.

Пожар начинается в мусорной корзине. Он остается незамеченным. Через минуту загорается диван, и дым начинает заполнять комнату. Температура растет. Через две минуты человек может потерять сознание.

Через три минуты вся комната в огне. Уже никто не может остаться в живых. Через четыре минуты коридоры станут непроходимыми. Требуется всего лишь 5 минут, чтобы пожар внутри дома вызвал гибель всех его обитателей. Итак, от 3-х до 5-ти минут и конец всему! Оказывается при пожаре время может стать Вашим худшим врагом.

Сколько времени требуется, чтобы остаться в живых при пожаре на кухне? Большинство людей думают, что у них 10 минут. А на самом деле через 30 секунд огонь станет неуправляемым. Нужно успеть выскочить, не задерживаясь и не думая о вещах, закрыть за собой дверь (но не на замок) и сообщить в пожарную охрану.

Для того, чтобы успеть эвакуироваться, существует незыблемое правило: в детских учреждениях детей младших групп, дошкольного возраста не одевают, а заворачивают в одеяло и выносят из опасной зоны. Учащихся школ выводят под руководством преподавателей или воспитателей, которые несут персональную ответственность за группу детей, с которой они занимались. В гостиницах для быстрой эвакуации запрещают упаковывать чемоданы и т.п.
5. При пожаре возможно возникновение паники.

Люди теряются в панике и ведут себя непредсказуемо. Порой при возникновении паники гибнет больше людей, чем от опасных факторов пожара. Совершенно очевидно, что человек, психологически подготовленный обученный в подобной экстремальной ситуации, вел бы себя иначе.

6. Гибель людей на пожарах во многом обусловлена отсутствием элементарных противопожарных знаний и навыков самозащиты у населения.
Статистика показывает, что большинство людей не думают о пожарах, не заботятся о безопасности своего жилья, пренебрегают собственной безопасностью и здоровьем близких. Об этом свидетельствует отсутствие огнетушителя, который позволил бы без проблем потушить начавшийся пожар телевизора, электроприбора, жира, масла на кухне людям преклонного возраста, школьникам. Практически единицы граждан обеспечили свои квартиры имеющимися в продаже автономными пожарными извещателями, работающими от обычной батарейки. Они устанавливаются в прихожей, на кухне, в комнате и при появлении дыма издают резкий звук, достаточно громкий, чтобы привлечь внимание, разбудить спящих. К сожалению, в обществе налицо явная недооценка значений реальности угрозы пожара, его опасных факторов.

Свидетельство тому - наше отношение к балконам, лоджиям жилых домов. Большинство из них остеклены, закрыты наглухо люки аварийных лестниц балконов, заложены проемы для перехода по лоджиям, в простенках установлена мебель. Все это не позволит самостоятельно эвакуироваться на не горящий этаж, отстояться за простенком балкона или лоджии при пожаре в квартире, если вы не смогли ее вовремя покинуть или из-за блокирования дымом основной эвакуационной лестницы. В этом случае шансов на то, чтобы выжить до прибытия подразделений пожарной охраны будет мало, особенно для тех, кто сегодня не думает об этом, не имеет средств индивидуальной защиты органов дыхания, или веревочной лестницы, спасательного комплекта для эвакуации через балконы, лоджии, окна, электрического фонаря, а также игнорирует проведение дома противопожарных тренировок, как это делают граждане развитых зарубежных стран.

ФГКУ «9 отряд ФПС по Алтайскому краю»

Со времен появления человека его всегда мучили вопросы таинства рождения и смерти. Жить вечно невозможно, да и, наверное, еще не скоро ученые изобретут эликсир бессмертия. Каждого волнует вопрос о том, что чувствует человек, когда умирает. Что происходит в этот момент? Эти вопросы волновали людей всегда, и до сих пор ученые так и не нашли ответа на них.

Трактовка смерти

Смерть является естественным процессом завершения нашего существования. Без нее невозможно представить себе эволюцию живого на земле. Что происходит, когда человек умирает? Такой вопрос интересовал и будет интересовать человечество, пока оно существует.

Уход из жизни в какой-то степени доказывает, что выживает сильнейший и наиболее приспособленный. Без него невозможен был бы биологический прогресс, и человек, может быть, никогда не появился бы.

Несмотря на то что этот закономерный процесс всегда интересовал людей, говорить о смерти тяжело и трудно. Прежде всего потому, что встает психологическая проблема. Разговаривая о ней, мы как бы мысленно приближаемся к концу своей жизни, поэтому так не хочется говорить о смерти в любом контексте.

С другой стороны, говорить о кончине трудно, потому что мы, живые, ее не переживали, поэтому не можем сказать, что чувствует человек, когда умирает.

Некоторые сравнивают смерть с обычным засыпанием, а другие утверждают, что это своего рода забывание, когда человек напрочь забывает обо всем. Но ни одни, ни другие, естественно, не правы. Эти аналогии нельзя назвать адекватными. Можно только утверждать, что смерть - это исчезновение нашего сознания.

Многие продолжают верить, что после своей смерти человек переходит просто в другой мир, где существует не на уровне физического тела, а на уровне души.

Можно с уверенностью сказать, что исследования смерти будут продолжаться всегда, но они так и не дадут окончательного ответа о чувствах людей в этот момент. Это просто невозможно, с того света еще никто не возвращался, чтобы нам поведать, как и что там происходит.

Что чувствует человек, когда умирает

Физические ощущения, наверное, в этот момент зависят от того, что привело к смерти. Поэтому они могут быть болезненными или нет, а некоторые считают, что и вполне приятными.

Внутренние ощущения у каждого перед лицом смерти свои. У большинства людей существует какой-то страх, сидящий внутри, они как бы сопротивляются и не хотят ее принимать, всеми силами цепляясь за жизнь.

Научные данные свидетельствуют, что после того, как сердечная мышца останавливается, мозг еще в течение нескольких секунд живет, человек уже ничего не чувствует, но еще в сознании. Некоторые считают, что именно в это время происходит подведение жизненных итогов.

Ответить на вопрос о том, как умирает человек, что при этом происходит, никто, к сожалению, не может. Все эти ощущения, скорее всего, строго индивидуальны.

Биологическая классификация смерти

Так как само понятие смерти - это биологический термин, то и к классификации необходимо подходить с этой точки зрения. Исходя из этого, можно выделить следующие категории смерти:

  1. Естественная.
  2. Неестественная.

К естественной можно отнести физиологическую кончину, которая может наступить из-за:

  • Старения организма.
  • Недоразвития плода. Поэтому он погибает практически сразу после рождения или еще в утробе матери.

Неестественная смерть подразделяется на следующие виды:

  • Смерть от болезни (инфекции, сердечно-сосудистые заболевания).
  • Внезапная.
  • Скоропостижная.
  • Смерть от внешних факторов (механические повреждения, нарушение дыхания, от воздействия электрического тока или низких температур, врачебное вмешательство).

Вот так примерно можно дать характеристику смерти с биологической точки зрения.

Социально-правовая классификация

Если о смерти говорить в этом ракурсе, то она может быть:

  • Насильственная (убийство, самоубийство).
  • Ненасильственная (эпидемии, несчастный случай на производстве, профессиональные болезни).

Насильственная смерть всегда связана с воздействием извне, в то время как ненасильственная обусловлена старческой дряблостью, заболеваниями или физическими недостатками.

При любом виде смерти повреждения или болезни запускают патологические процессы, которые и являются непосредственно причиной ухода из жизни.

Даже если известна причина смерти, все равно невозможно сказать, что видит человек, когда умирает. Этот вопрос так и останется без ответа.

Признаки смерти

Можно выделить первоначальные и достоверные признаки, которые свидетельствуют о том, что человек умер. К первой группе относятся:

  • Тело находится без движения.
  • Бледная кожа.
  • Сознание отсутствует.
  • Дыхание остановилось, пульса нет.
  • Отсутствует реакция на внешние раздражители.
  • Зрачки не реагируют на свет.
  • Тело становится холодным.

Признаки, которые говорят о 100%-м наступлении смерти:

  • Труп окоченевший и холодный, начинают появляться трупные пятна.
  • Поздние трупные проявления: разложение, мумификация.

Первые признаки можно несведущему человеку перепутать с потерей сознания, поэтому констатировать смерть должен только врач.

Этапы смерти

Уход из жизни может занимать разные периоды времени. Это может длиться минуты, а в некоторых случаях часы или дни. Умирание - это динамический процесс, при нем смерть наступает не сразу, а постепенно, если не иметь в виду мгновенную кончину.

Можно выделить следующие стадии умирания:

  1. Преагональное состояние. Нарушаются процессы кровообращения и дыхания, это приводит к тому, что тканям начинает не хватать кислорода. Такое состояние может продолжаться как несколько часов, так и несколько дней.
  2. Терминальная пауза. Останавливается дыхание, нарушается работа сердечной мышцы, прекращается деятельность мозга. Этот период длится всего несколько минут.
  3. Агония. Организм резко начинает борьбу за выживание. В это время происходят короткие остановки дыхания, ослабление сердечной деятельности, в результате все системы органов не могут осуществлять свою работу нормально. Изменяется внешний вид человека: западают глаза, нос становится острым, нижняя челюсть начинает отвисать.
  4. Клиническая смерть. Прекращается дыхание и кровообращение. В этот период человека еще можно оживить, если прошло не более 5-6 минут. Именно после возвращения к жизни на этой стадии многие люди рассказывают, что происходит, когда человек умирает.
  5. Биологическая смерть. Организм окончательно прекращает свое существование.

После смерти многие органы еще несколько часов сохраняют свою жизнеспособность. Это очень важно, и именно в этот период их можно использовать для пересадки другому человеку.

Клиническая смерть

Ее можно назвать переходным этапом между окончательной гибелью организма и жизнью. Сердце прекращает свою работу, дыхание останавливается, исчезают все признаки жизнедеятельности организма.

В течение 5-6 минут в головном мозге еще не успевают запуститься необратимые процессы, поэтому в это время есть все шансы вернуть человека к жизни. Адекватные реанимационные действия заставят сердце вновь биться, органы функционировать.

Признаки клинической смерти

Если внимательно наблюдать за человеком, то достаточно легко можно определить наступление клинической смерти. У нее следующие признаки:

  1. Пульс отсутствует.
  2. Дыхание прекращается.
  3. Сердце перестает работать.
  4. Сильно расширенные зрачки.
  5. Отсутствуют рефлексы.
  6. Человек находится без сознания.
  7. Кожа бледная.
  8. Тело занимает неестественное положение.

Чтобы определить наступление этого момента, необходимо прощупать пульс и посмотреть зрачки. Клиническая смерть отличается от биологической тем, что зрачки сохраняют способность реагировать на свет.

Пульс можно прощупать на сонной артерии. Обычно это делают одновременно с проверкой зрачков, чтобы ускорить диагностирование клинической смерти.

Если человеку не оказать помощь в этот период, то наступит биологическая смерть, и тогда вернуть его к жизни уже будет невозможно.

Как распознать приближающуюся смерть

Многие философы и врачи сравнивают процесс рождения и смерти между собой. Они всегда индивидуальны. Невозможно с точностью предсказать, когда человек покинет это мир и как это произойдет. Однако большинство умирающих испытывают похожие симптомы в момент приближения смерти. На то, как умирает человек, даже могут не влиять причины, спровоцировавшие начало этого процесса.

Перед самой кончиной происходят в организме определенные психологические и физические изменения. Среди наиболее ярких и часто встречающихся можно отметить следующие:

  1. Энергии остается все меньше и меньше, часто посещает сонливость и слабость во всем теле.
  2. Меняется частота и глубина дыхания. Периоды остановки сменяются частыми и глубокими вдохами.
  3. Происходят изменения в органах чувств, человек может слышать или видеть то, чего не слышно остальным.
  4. Аппетит становится слабым или практически исчезает.
  5. Изменения в системах органов приводят к появлению слишком темной мочи и труднопроходимого стула.
  6. Наблюдаются скачки температуры. Высокая может резко сменяться низкой.
  7. Человек полностью теряет интерес к внешнему миру.

Когда человек серьезно болен, то перед смертью могут наблюдаться и другие симптомы.

Чувства человека в момент утопления

Если задавать вопрос о том, что чувствует человек, когда умирает, то ответ может зависеть от причины и обстоятельств смерти. У каждого это происходит по-своему, но в любом случае в этот момент ощущается острый дефицит кислорода в головном мозге.

После того как движение крови приостановлено, независимо от способа, примерно через 10 секунд человек теряет сознание, а немного позже наступает гибель организма.

Если причиной смерти становится утопление, то в момент, когда человек оказывается под водой, у него начинается паника. Так как без дыхания обойтись невозможно, то через некоторое время утопающему приходится сделать вдох, но вместо воздуха в легкие поступает вода.

По мере заполнения водой легких в груди появляется чувство жжения и распирания. Постепенно, через несколько минут, появляется спокойствие, которое говорит о том, что сознание скоро покинет человека, и это приведет к смерти.

Продолжительность жизни человека в воде будет также зависеть и от ее температуры. Чем она холоднее, тем быстрее наступает переохлаждение организма. Даже если человек находится на плаву, а не под водой, шансы на выживание уменьшаются с каждой минутой.

Уже бездыханное тело еще можно достать из воды и вернуть к жизни, если прошло не очень много времени. Первым делом надо освободить дыхательные пути от воды, а затем в полной мере провести реанимационные мероприятия.

Чувства в момент сердечного приступа

В некоторых случаях бывает так, что резко человек упал и умер. Чаще всего смерть от сердечного приступа наступает не внезапно, а развитие недуга происходит постепенно. Инфаркт миокарда сражает человека не сразу, в течение некоторого времени люди могут чувствовать определенный дискомфорт в груди, но стараются не обращать на это внимания. В этом и состоит большая ошибка, которая заканчивается смертью.

Если вы склонны к сердечным приступам, то не стоит ожидать, что все само собой пройдет. Такая надежда может стоить вам жизни. После остановки сердца пройдет всего несколько секунд до того момента, пока человек потеряет сознание. Еще несколько минут, и смерть уже забирает у нас близкого.

Если пациент находится в больнице, то у него есть шанс выкарабкаться, если врачи вовремя обнаружат остановку сердца и проведут реанимационные мероприятия.

Температура тела и смерть

Многих интересует вопрос о том, при какой температуре человек умирает. Большинство еще со школьной скамьи из уроков биологии помнят, что для человека температура тела выше 42 градусов считается смертельной.

Некоторые ученые связывают смертельный исход при высокой температуре со свойствами воды, молекулы которой изменяют свою структуру. Но это только догадки и предположения, с которыми науке еще предстоит разбираться.

Если рассматривать вопрос о том, при какой температуре человек умирает, когда начинается переохлаждение организма, то можно сказать, что уже при остывании тела до 30 градусов человек теряет сознание. Если в этот момент не принять никаких мер, то наступит смерть.

Много таких случаев происходит с людьми в алкогольном опьянении, которые засыпают в зимнее время прямо на улице и уже больше не просыпаются.

Эмоциональные изменения накануне смерти

Обычно перед кончиной человек становится совсем безучастным ко всему происходящему вокруг. Он перестает ориентироваться во времени и датах, становится молчаливым, но некоторые, наоборот, начинают постоянно говорить о предстоящей дороге.

Близкий умирающий человек может начать вам рассказывать, что разговаривал или видел умерших родственников. Другим крайним проявлением в это время является состояние психоза. Близким всегда тяжело все это переносить, поэтому можно обратиться к врачу и посоветоваться насчет приема лекарственных препаратов, чтобы облегчить состояние умирающего.

Если человек впадает в состояние оцепенения или часто и подолгу спит, не старайтесь его растормошить, разбудить, просто будьте рядом, держите за руку, разговаривайте. Многие даже в состоянии комы все прекрасно слышат.

Смерть - это всегда тяжело, каждый из нас переступит в свое время через эту грань между жизнью и небытием. Когда это произойдет и при каких обстоятельствах, что вы будете при этом чувствовать, к сожалению, предсказать невозможно. У всех это сугубо индивидуальные ощущения.

Фаза «первичного опустошения»

На 5 сутки после облучения уровень большинства форменных элементов в крови начинает падать – наступает фаза «первичного опустошения» .

Клинически эта фаза проявляется при снижении содержания клеток до критически низкого уровня. Это время и определяет продолжительность скрытого периода.

Определение дозы

общего облучения организма по содержанию лейкоцитов в периферической крови на 7-9 сутки после облучения

Продолжительность скрытого периода тем меньше, чем выше доза

облучения:

При лёгкой форме ОЛБ скрытый период может закончиться через 30 и более суток;

При средней форме – через 15-30 суток;

При тяжелой форме – через 5-20 суток;

При крайне тяжёлой форме – скрытый период может отсутствовать.

III.Период разгара.

Наступает при падении числа клеток крови ниже критического уровня:

Кроме этого наблюдается:

токсемия,

преобладание катаболизма над анаболизмом,

вегетативная дистония,

аутоиммунные поражения.

Но основу поражения составляет нарушение кроветворной функции.

IV. Период восстановления

Если в период разгара не наступает смерть

регенераторные процессы в кроветворной системе приводят к увеличению числа зрелых клеток крови

происходит ликвидация симптоматики периода разгара.

В течение этого периода происходит полная или частичная нормализация функций критических систем организма.

Прогноз для жизни при ОЛБ:

Легкой степени – благоприятный;

Средней степени – благоприятный при проведении надлежащего лечения;

Тяжелой степени – сомнительный, даже интенсивная комплексная терапия не всегда оказывается успешной.

Трудоспособность при ОЛБ:

Легкая степень – сохраняется. В течение 2-го месяца болезни требуется ограничение тяжёлого физического труда;

Средняя степень - к началу 3-го месяца болезни возможно возвращение к лёгкому труду, а через год – к обычной деятельности;

Тяжёлая степень - работоспособность полностью не восстанавливается. Лёгкий труд возможен с 4-го месяца болезни.

Кишечная форма ОЛБ:

При общем облучении в дозе 10-20 Гр развивается кишечная форма ОЛБ, основу которой составляет кишечный синдром.

Он связан с повреждением и гибелью клеток эпителия тонкой кишки. Следствием этого повреждения является:

прекращение резорбции из просвета тонкой кишки воды и

электролитов

развивается дегидратация;нарушение барьерной функции кишечной стенки

токсичные вещества (токсины кишечной палочки) поступают

в кровь и лимфу

В период разгара кишечной формы ОЛБ:

ухудшается самочувствие,

развивается диарея,

повышается температура тела,

развивается орофарингеального синдром,

обезвоживание,

интоксикация,

эндогенная инфекция.

При условии лечения поражённые с кишечной формой ОЛБ могут прожить до двух и даже двух с половиной недель. Причинами смерти могут быть:

Панцитопенический синдром;

Присоединение вторичной инфекции;